Diabetologia：启动时但功能受损的记忆Tregs在1型糖尿病患者进展缓慢的过程中逐渐扩展

从第一次用到肾脏自身HIV到用到1DF冠心病外科腹泻的困难重重数万人在学童时期就有不太好的叙述，多个肾脏自身HIV非典DF的学童早先有70%在血清叠加后10短期内患上冠心病，而随访15年的学童这一数量上升到84%。相比于之下，占外科1DF冠心病一半以上的DF1DF冠心病的发病机制还不能得到更好的研究成果。

越发多的人开始应该用于分期系统来界定1DF冠心病的困难重重：群锥体在用到多种肾脏自身HIV时离开第1下一阶段，用到血糖精神状态时离开第2下一阶段，用到腹泻时离开第3下一阶段。一些多发肾脏自身HIV非典DF的群锥体，在1期和2期，困难重重较更慢，并发展为发病的1DF冠心病。我们早先叙述了一三组在首次检验到多种肾脏自身HIV试样后至更少10年无冠心病的极更慢困难重重者，这三组病变多人更少，但特质极其明确。随后，我们断定肾脏自身抗原特异性CD8+T蛋白质催化在困难重重很更慢的病变早先原则上不存有，但在现阶段发病和长年存有的冠心病病变早先很容易检验到。这确实表明，与困难重重病变相比于，这些病变自身免疫催化的调节增强。

现代研究成果表明，尽管调节性T蛋白质(Treg)数量正常，但冠心病病变存有一些机制缺陷，其早先包括对IL-2的催化控制能力增大。此外，冠心病病变早先的震荡CD4+T蛋白质确实对调节更具抵抗性，乏善可陈为震荡T蛋白质的诱发减弱，自然造成的Treg和锥体外造成的诱导Treg，以及抗原经历的CD4+T蛋白质早先IL-2催化减弱。本研究成果的目的是叙述了CD4+调节性T蛋白质(Treg)在海岸边极很更慢困难重重者早先的特质，他们的平均年龄为43岁(31-72岁)，随访时间为18-32年。

方法有：BOX研究成果是一项以一些人为基础的纵向研究成果，在21岁以下复发的病变亲族早先检查1DF冠心病的生命危险因素所。我们早先叙述了长年很更慢困难重重者的特质，他们保持稳定多重肾脏自身HIV非典DF有约10年，但不能用到冠心病的外科腹泻，更慢性或非展开性自身免疫。随后，10名继续保持稳定无冠心病并想提供大量血液循环试样的很更慢困难重重者纳入T和B蛋白质机制归纳。在目前为止的研究成果早先，8名更慢困难重重者(SP三组)，早先位年龄43岁(31-72岁)，18 - 32岁之间的肾脏自身HIV非典DF。所有的参与者都西北面1DF冠心病困难重重的1期，尽管一些人随后失去了肾脏自身HIV对某些抗原的非典DF催化，然而，一名病变已经西北面2期至更少6年，但不能用到外科腹泻，一名病变被病因为冠心病，该受试者72岁，在挖掘出实验试样时，其HbA1c上升到53 mmol/mol(7%)，在数据归纳早先对该丝氨酸展开了单独指标。分离出来外周血单个氘蛋白质(PBMCs)，采用多值流式蛋白质法术和T蛋白质诱发试验指标丝氨酸早先Treg的振幅、环境因素所和机制。应该用于FlowSOM和CITRUS(聚类鉴定、表征和重生)展开无监督聚类归纳，指标Treg环境因素所。

结果：与心理健康丝氨酸相比于，来自更慢困难重重锥体的无意识CD4+T蛋白质的监督聚类看出，激活的无意识CD4+ Treg振幅上升，与止痛药诱导的TNFR相关抗原(GITR)隐含上升有关。一名HbA1c上升的病变与困难重重很更慢者和转换的准确数万人相比于，Treg谱大致相同。机制归纳表明，与心理健康丝氨酸相比于，来自很更慢困难重重锥体的Treg介导的CD4+震荡T蛋白质诱发明显受损。乏善可陈为对震荡CD4+T蛋白质CD25和CD134隐含的诱发上升。

示意图1 深入的环境因素所归纳看出，CD4+Treg亚DF在更慢困难重重队列早先上升。由FlowSOM生成的Treg室，聚集在来自所有丝氨酸的活CD4+CD45RA -蛋白质上。根据上标物隐含鉴定出10个元簇:无意识T蛋白质_1;无意识T cell_2;无意识T cell_3;无意识T cell_4;CD49b无意识T蛋白质;HLA-DR + GITR +无意识T蛋白质;存储器Treg_1;存储器Treg_2;存储器Treg_3;和存储器Treg_4。(a)应该用于9个相异Treg上标生成的10个元簇的MST。每个路由表代表一个战斗群(100个战斗群)，更大的元战斗群(10个元战斗群)在路由表三组周边剪裁。每个路由表早先的饼示意图回应该单个上标的隐含级别。(b)每个元聚类的热示意图，以看出整锥体上标隐含。(c, d)为HD三组(c)和SP三组(d)生成示意图，以及FlowSOM标识的每个元簇的覆盖层。(e-l)相比总质量为每个metacluster筒1](总质量> 0.05%)确定为HD和SP三组:存储器Treg_2 (e),存储器Treg_3 (f),存储器Treg_4 (g), HLA-DR + GITR +无意识T蛋白质(h)、无意识T cell_1(i),无意识T cell_2 (j),无意识T cell_3 (k) n d CD49b无意识T蛋白质(l)。浅蓝色圆圈代表**SP 606。**p< 0.01, Wilcoxon配对标记秩检验。此键适用于示意图形部分(a)， (c)， (d)和d (e-l)

示意图2 应该用于CITRUS的预测模DF证实，Treg振幅的上升是困难重重很更慢的图标。这两项相关联(a - f)和柑橘归纳(g-k)相对SP参与者和转换的HD参与者在CD4+CD45RA−T蛋白质上的差异。(a)杂交CD25+ cd127 lotreg和CD25loCD127+T c e l群锥体的代表性示意图。CD25+ cd127lotreg被CD39和FOXP3富集，然后通过HLA-DR和GITR隐含展开分离出来，实时FlowSOM群锥体。(b) HD(黑点)和SP(黑斑)三组以及丝氨酸SP 606(浅蓝色)早先CD25+ cd127的振幅汇总示意图。(c-f) CD25+CD127loCD39+FOXP3+和CD25loCD127+相关联子集的筒1];(c) HLA-DRloGITR−(存储器Treg_2)， (d) HLA-DRintGITRlo(存储器Treg_3)， (e) HLA- d RhiGITR+(存储器Treg_4)， (f) HLA- d RhiGITR+(HLA-DR+GITR+存储器T cell)。(g - i)棉花簇螺旋由(g) CD127， (h) CD25和(i) FOXP3隐含强度着色，箭头突出的簇被标识为SP和HD队列之间的相异。(j)筒1]看出了在SP(黑斑)和HD(灰点)三组早先，CITRUS无意识Treg_3和Treg_4的相比总质量(数量)。(k)直方示意图看出每个簇的环境因素所(粉红色)和Treg上标相比隐含与取材隐含(浅蓝色);上列，存储器Treg_3;请注意即刻，存储器Treg_4。取材与所有其他簇早先上标的隐含有关。*p< 0.05， **p< 0.01, Wilcoxon配对标记秩检验

示意图3 与心理健康献血者相比于，困难重重很更慢者无意识treg的GITR上升。每个无意识CD4+T蛋白质元簇(无意识T蛋白质_1;无意识T cell_2;无意识T cell_3;CD49b +无意识T蛋白质;HLA-DR + GITR +无意识T蛋白质;存储器Treg_2;存储器Treg_3;来自FlowSOM的memory Treg_4)检验每个隐含上标的变异。(a,b)来自HD (a)和S (b)队列的隐含热示意图(sp606不包括在内)。(c,d)无意识Treg_4元簇早先所有HD(蓝灰色)、所有SP(浅蓝色)和SP 606(浅蓝色)的FlowSOM GITR隐含结合，看出直方示意图(c)和汇总示意图(d)。Wilcoxon配对标记秩和检验，p< 0.07(浅蓝色)所有丝氨酸包括，p< 0.05(浅蓝色)丝氨酸SP 606和转换的HD不包括在测试早先。(e,f) HLA-DRhiGITR+Tregs早先GITR隐含，从这两项相关联，从所有HD(蓝灰色)、所有SP(浅蓝色)和SP 606(浅蓝色)结合，看出直方示意图(e)和汇总示意图(f) *p< 0.05, Wilcoxon配对标记秩检验

示意图4 来自很更慢困难重重的CD4+ treg蛋白质控制震荡CD4+T蛋白质的控制能力增大。SP三组用浅蓝色的支线和圆圈回应该，HD三组用黑色的支线和圆圈回应该，浅蓝色的支线/圆圈回应该丝氨酸sp606。应该用于CD4+CD25+ Treg分选试剂盒对CD4+T蛋白质展开分选。CD4+CD25−(这样的话者)被上标为CFSE, Treg按通过观察的数量溶液。用抗CD3 /28微珠诱导蛋白质，培植3天后展开流式蛋白质法术检验。(a-d)与CD4+这样的话者相比应该的treg培植(其会)(e-h) HD、SP或SP 606 Treg与HD这样的话者培植。(a,b,f) CFSE抑制(a,e)和CFSE诱发一般而言(b,f)。(c, d,h) CD25 (c,g)和CD134 (d,h)的诱发一般而言。应该用于非典DF对照(激活的积极响应该蛋白质不含treg)计算诱发一般而言。*p< 0.05， **p< 0.01， ***p< 0.001，重复测量双向方差归纳。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重相对测试

示意图5 震荡CD4+T蛋白质对很更慢困难重重的T蛋白质诱导的诱发更恰当。SP三组用浅蓝色的支线和圆圈回应该，HD三组用黑色的支线和圆圈回应该，浅蓝色的支线/圆圈回应该丝氨酸sp606。应该用于CD4+CD25+Treg分选试剂盒对CD4+T蛋白质展开分选。CD4+CD25−(这样的话者)被cfsel上标，treg按通过观察的数量溶液。用抗CD3 /28微珠诱导蛋白质，培植3天后展开流式蛋白质法术(CD25反染)和蛋白质因子归纳。HD Treg与HD、SP或sp606这样的话者协力培植。(a,b) CFSE抑制(a)和CFSE诱发百分数万人(b)。(c,d) CD25诱发百分数万人(c)和CD134诱发百分数万人(d)。(e,f) IFN-γ(e)和IL-17A (f)在共培植早先的隐含。***p< 0.001， **p< 0.01，重复测量双向方差归纳。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重相对测试

结论：我们得出的结论是，来自很更慢困难重重子的诱导无意识CD4+Treg在GITR隐含早先得到了拓展和丰富，特别强调了全面研究成果Treg在1DF冠心病效用群锥体早先的异质性的全面性。

原文出处：

Boldison J, Long AE, Aitken RJ,et al.Activated but functionally impaired memory Tregs are expanded in slow progressors to type 1 diabetes.Diabetologia 2021 Oct 28